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大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒實驗使用說明書
發(fā)布時間:2025/8/4瀏覽:31次
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  大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒實驗使用說明書

  BS-3008 大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒

  以下是?大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒?的實驗使用說明書綜合整理:

  一、實驗原理?

  采用?雙抗體夾心法?或?固相夾心法?ELISA技術(shù)。通過包被抗體捕獲樣本中的TNF-β,再與酶標(biāo)抗體形成復(fù)合物,經(jīng)TMB顯色后,顏色深淺與TNF-β濃度成正比。

  二、試劑盒組成?

  核心組分?:

  預(yù)包被微孔板(96孔)

  標(biāo)準(zhǔn)品(濃度梯度:15.6~1000 pg/mL,凍干品需復(fù)溶)

  酶標(biāo)抗體(HRP標(biāo)記)

  顯色底物(TMB A/B)

  終止液(2N H?SO?)

  濃縮洗滌液(20×~30×)

  需自備器材?:

  酶標(biāo)儀(450nm)、移液器(10~1000μL)

  37℃恒溫箱、離心機(2000~5000×g)

  三、樣本處理?

  血清/血漿?:全血室溫靜置2小時后離心(1000×g,20分鐘),避免溶血或脂血。

  組織勻漿?:按1:9(重量:體積)加入PBS勻漿,離心取上清。

  保存?:短期存于4℃,長期需分裝凍存于-20℃(避免反復(fù)凍融)。

  四、操作步驟?

  試劑準(zhǔn)備?:

  復(fù)溫:所有試劑室溫平衡30分鐘。

  稀釋洗滌液(如20×→1×)。

  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?:

  按說明書梯度稀釋(如1000→500→250 pg/mL)。

  加樣與溫育?:

  加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本(100μL/孔),37℃孵育90分鐘。

  洗滌3次(每孔加洗滌液靜置1分鐘后甩干)。

  顯色與檢測?:

  加TMB底物(90μL/孔),避光反應(yīng)15分鐘→終止液(50μL/孔)。

  酶標(biāo)儀讀取OD450nm值。

  五、注意事項?

  關(guān)鍵控制點?:

  移液精度誤差≤2%,避免氣泡干擾。

  顯色液需避光現(xiàn)配,終止液傾倒緩慢防濺。

  數(shù)據(jù)計算?:

  以標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合樣本濃度(推薦四參數(shù)邏輯曲線)。

  保存條件?:

  未開封試劑盒:2-8℃保存6個月;開封后板條需密封防潮。

  六、常見問題?

  顯色異常?:檢查底物是否過期或污染。

  高背景值?:洗滌不凈或樣本濃度過高(需稀釋)。

  注:以上資料僅供參考,如需具體品牌試劑盒的完整說明,可咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商的詳細(xì)文檔。

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