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大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒實驗使用說明書
BS-3008 大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒
以下是?大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒?的實驗使用說明書綜合整理:
一、實驗原理?
采用?雙抗體夾心法?或?固相夾心法?ELISA技術(shù)。通過包被抗體捕獲樣本中的TNF-β,再與酶標(biāo)抗體形成復(fù)合物,經(jīng)TMB顯色后,顏色深淺與TNF-β濃度成正比。
二、試劑盒組成?
核心組分?:
預(yù)包被微孔板(96孔)
標(biāo)準(zhǔn)品(濃度梯度:15.6~1000 pg/mL,凍干品需復(fù)溶)
酶標(biāo)抗體(HRP標(biāo)記)
顯色底物(TMB A/B)
終止液(2N H?SO?)
濃縮洗滌液(20×~30×)
需自備器材?:
酶標(biāo)儀(450nm)、移液器(10~1000μL)
37℃恒溫箱、離心機(2000~5000×g)
三、樣本處理?
血清/血漿?:全血室溫靜置2小時后離心(1000×g,20分鐘),避免溶血或脂血。
組織勻漿?:按1:9(重量:體積)加入PBS勻漿,離心取上清。
保存?:短期存于4℃,長期需分裝凍存于-20℃(避免反復(fù)凍融)。
四、操作步驟?
試劑準(zhǔn)備?:
復(fù)溫:所有試劑室溫平衡30分鐘。
稀釋洗滌液(如20×→1×)。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?:
按說明書梯度稀釋(如1000→500→250 pg/mL)。
加樣與溫育?:
加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本(100μL/孔),37℃孵育90分鐘。
洗滌3次(每孔加洗滌液靜置1分鐘后甩干)。
顯色與檢測?:
加TMB底物(90μL/孔),避光反應(yīng)15分鐘→終止液(50μL/孔)。
酶標(biāo)儀讀取OD450nm值。
五、注意事項?
關(guān)鍵控制點?:
移液精度誤差≤2%,避免氣泡干擾。
顯色液需避光現(xiàn)配,終止液傾倒緩慢防濺。
數(shù)據(jù)計算?:
以標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合樣本濃度(推薦四參數(shù)邏輯曲線)。
保存條件?:
未開封試劑盒:2-8℃保存6個月;開封后板條需密封防潮。
六、常見問題?
顯色異常?:檢查底物是否過期或污染。
高背景值?:洗滌不凈或樣本濃度過高(需稀釋)。
注:以上資料僅供參考,如需具體品牌試劑盒的完整說明,可咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商的詳細(xì)文檔。
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