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人瘦素(LEP)ELISA試劑盒實驗使用說明書
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  人瘦素(LEP)ELISA試劑盒使用說明書

  BS-0083人瘦素(LEP)ELISA試劑盒

  以下是綜合多個高可信度來源整理的人瘦素(LEP)ELISA試劑盒使用說明書,涵蓋實驗原理、操作步驟及關(guān)鍵注意事項:

  一、實驗原理?

  采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。純化的抗LEP抗體包被微孔板,依次加入標準品/樣本、生物素標記抗體及HRP標記親和素,形成復(fù)合物。TMB顯色后,顏色深淺與瘦素濃度呈正相關(guān),通過450nm波長測定OD值計算濃度。

  二、試劑盒組成?

  組分 規(guī)格/說明 保存條件

  預(yù)包被微孔板 96孔 2-8℃

  標準品 凍干粉(濃度梯度0.15-50ng/mL) -20℃

  生物素標記抗體 100μL(1:100稀釋) 2-8℃

  HRP標記親和素 100μL(1:100稀釋) 2-8℃

  顯色劑A/B液 各6mL 避光2-8℃

  終止液 6mL(2N H?SO?) 2-8℃

  20×洗滌緩沖液 20mL 室溫(結(jié)晶需水浴溶解)

  三、樣本處理?

  血清/血漿?

  室溫凝固10-20分鐘后離心(2000-3000×g,20分鐘),避免溶血。

  血漿需EDTA/肝素抗凝,離心后取上清。

  組織勻漿?

  按1:9(w/v)加入PBS勻漿,離心取上清。

  細胞上清?

  直接離心(2000×g,10分鐘)去除顆粒。

  保存條件?:-20℃分裝凍存,避免反復(fù)凍融。

  四、操作步驟?

  試劑平衡?:從冰箱取出后室溫平衡20分鐘。

  加樣?

  標準品孔?:加入50μL梯度稀釋的標準品。

  樣本孔?:加入10μL樣本+40μL樣本稀釋液。

  溫育?

  37℃孵育60分鐘,洗滌后加入生物素抗體,再孵育30分鐘。

  顯色與終止?

  TMB顯色15分鐘,加終止液后15分鐘內(nèi)測OD值。

  五、關(guān)鍵注意事項?

  洗滌?:手工洗板需拍干,自動洗板機每孔加350μL洗滌液。

  顯色控制?:避免顯色時間過長導(dǎo)致背景升高。

  儀器校準?:使用前確認酶標儀波長準確性。

  六、結(jié)果計算?

  以標準品濃度為橫坐標、OD值為縱坐標繪制曲線,樣本濃度通過曲線方程計算。若樣本OD值超出范圍,需用稀釋液稀釋后重測。

  注:以上資料僅供參考,本試劑盒僅用于科研,不可用于臨床診斷。

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