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人脂聯(lián)素(ADP)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說明書
發(fā)布時間:2025/8/7瀏覽:25次
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  以下是關(guān)于人脂聯(lián)素(ADP)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明書綜合整理:

  BS-1528人脂聯(lián)素(ADP)ELISA試劑盒

  一、實(shí)驗(yàn)原理

  采用雙抗體夾心法檢測樣本中ADP含量。通過抗-ADP抗體包被微孔板捕獲ADP,再與HRP標(biāo)記的ADP抗體結(jié)合形成復(fù)合物,經(jīng)TMB顯色后測定450nm吸光度(OD值),顏色深淺與ADP濃度呈正相關(guān)。

  二、試劑盒組成

  組分 規(guī)格(96T) 保存條件

  預(yù)包被酶標(biāo)板 1×96孔 2-8℃干燥

  標(biāo)準(zhǔn)品 0.5ml×1瓶(1350μg/L) 2-8℃冷藏

  酶標(biāo)試劑(HRP標(biāo)記) 6ml×1瓶 2-8℃避光

  顯色劑A/B液 各6ml×1瓶 2-8℃避光

  20×濃縮洗滌液 50ml×1瓶 2-8℃冷藏

  終止液 6ml×1瓶 常溫保存

  三、樣本處理要求

  血清/血漿?

  室溫凝固10-20分鐘后離心(2000-3000rpm,20分鐘),避免溶血

  血漿推薦使用EDTA或肝素抗凝

  細(xì)胞培養(yǎng)上清?

  直接離心取上清,或PBS稀釋細(xì)胞懸液后凍融裂解

  組織樣本?

  需用PBS勻漿后離心,分裝保存于-20℃

  注意事項(xiàng)?

  含NaN3的樣本會HRP活性,需避免使用

  反復(fù)凍融不超過3次

  四、操作步驟(以96孔板為例)

  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?

  將1350μg/L標(biāo)準(zhǔn)品按梯度稀釋(如:1350→675→337.5→168.75→84.38→42.19→21.09→0μg/L)

  加樣孵育?

  標(biāo)準(zhǔn)品孔/樣本孔各加100μl,37℃孵育120分鐘

  洗滌?

  用1:20稀釋的洗滌液洗板5次,每次靜置10-20秒

  加酶標(biāo)試劑?

  每孔加HRP標(biāo)記抗體50μl,37℃孵育60分鐘

  顯色與終止?

  加TMB底物A/B液各50μl,避光反應(yīng)15分鐘后加終止液50μl

  五、結(jié)果計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

  檢測范圍通常為21.09-1350μg/L,靈敏度可達(dá)0.01μg/ml

  六、注意事項(xiàng)

  試劑使用前需室溫平衡30分鐘,濃縮洗滌液結(jié)晶需37℃孵育15分鐘

  顯色時間超過20分鐘可能導(dǎo)致背景過高

  不同批號試劑不可混用

  注,以上資料僅供參考,如需具體品牌說明書,可參考本生、天正信達(dá)或分細(xì)生物的詳細(xì)文檔。

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