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人腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒的實驗使用說明書核心內(nèi)容如下:
BS-0120人腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒
一、實驗原理?
采用?雙抗體夾心法?檢測TNF-β濃度:
包被抗體?:微孔板預(yù)包被抗人TNF-β單克隆抗體。
抗原結(jié)合?:樣本或標(biāo)準(zhǔn)品中的TNF-β與固相抗體結(jié)合,形成復(fù)合物。
酶標(biāo)抗體反應(yīng)?:加入HRP標(biāo)記的二抗,與抗原結(jié)合形成“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。
顯色與定量?:TMB底物顯色(藍色→黃色),450nm測OD值,濃度與顏色深淺正相關(guān)。
二、試劑盒組成?
預(yù)包被微孔板
標(biāo)準(zhǔn)品(如180、120、60、30、15 ng/L梯度)
HRP標(biāo)記檢測抗體
樣本稀釋液、洗滌液、顯色液(TMB)、終止液
三、樣本處理要求?
樣本類型 處理方法 保存條件
血清? 3000g離心10min,取上清 -20℃避免凍融
血漿? EDTA/肝素抗凝,3000g離心30min -20℃保存
細胞上清? 3000g離心10min去除顆粒 -20℃分裝保存
注意?:避免溶血、脂血或NaN3干擾。
四、操作步驟?
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?:2倍梯度稀釋(如180→15 ng/L),每孔50μL。
加樣?:樣本稀釋5倍后加樣(40μL稀釋液+10μL樣本)。
溫育?:37℃孵育30分鐘。
洗滌?:洗滌3-5次,去除未結(jié)合物質(zhì)。
顯色與終止?:TMB避光顯色15分鐘,加終止液變黃。
五、結(jié)果計算?
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
樣本濃度通過曲線方程計算,靈敏度通?!?.68 pg/mL。
六、注意事項?
試劑保存?:2-8℃避光,有效期6個月。
避免污染?:移液器槍頭需更換,避免交叉污染。
顯色控制?:顯色時間過長可能導(dǎo)致假陽性。
注:以上資料僅供參考,如需進一步了解ELISA操作步驟或樣本處理方法,可參考試劑盒說明書。
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